一、实验目的
1、了解一般培养基的配制原理，掌握培养基常规配制程序。
2、了解高压蒸汽灭菌和干热灭菌的原理，掌握操作步骤。
3、理解和掌握微生物接种、分离基本技术的原理及操作要点；熟悉微生物接种、分离的无菌操作技术。
二、实验原理
1、培养基是根据微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工方法配制而成的基质，是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料，主要含有微生物生长繁殖所必需的碳源、氮源、无机盐、生长因子及水分，并具有适宜的PH、合适的渗透压等。由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质要求各不相同，加之实验和研究目的不同，所以培养基的种类很多，需要按实际情况加以选择，但一般配制程序却大致相同：称药品→溶解→调pH→琼脂融化（补水，固体培养基用）→过滤（可省略）→分装→包扎标记→灭菌→摆斜面或倒平板→无菌检查
2、微生物在自然界中呈混杂状态共同存在，要获得特定的微生物，必需从中把它们分离出，即将待分离的样品进行一定的稀释，并使微生物的细胞（或他子）尽量以分散态存在，然后使其长成一个个纯种单菌落。然而上述工作又离不开接种，即将一种微生物转移到另一灭过菌的培养基上的过程。
三、材料与仪器
营养琼脂粉、半固体琼脂粉、营养肉汤粉、大肠杆菌、500ml烧杯与两个250ml烧杯、培养皿、刻度吸管、涂布棒、玻璃棒、接种环、接种针、酒精灯、打火机、电炉、电子称、洗耳球、棉线、报纸、灭菌锅、量筒、称量纸、三角瓶、试管、试管架等。
四、实验步骤
1、称药品：18.3g营养琼脂粉 1.1g半固体琼脂粉 0.9g营养肉汤粉
2、加水溶解，加热煮沸。
（注：肉汤只需加热）营养琼脂250mL/组；半固体琼脂50mL/组；营养肉汤50mL／组
3、培养基分装
取空白干净试管4支，每支试管装入1／3试管高度的营养琼脂培养基，加塞，包扎。剩下的营养琼脂培养基全部转移入250mL三角瓶，加塞，包扎。取空白干净试管4支，每支试管装入1/3试管高度的半固体琼脂培养基，加塞，包扎。取空白干净试管4支，每支试管装入1／3试管高度的营养内汤，加塞，包扎。
4、灭菌
培养基与生理盐水置于高压蒸汽灭菌锅里灭菌其它器皿放在干热灭菌锅灭菌。
5、接种
①斜面接种双手消毒，点燃酒精灯 左手握好斜面和有菌种的一面 两根试管塞过火，并旋转一下 灼烧接种环，右手拔下两根试管塞 冷却的接种环刮取少量大肠杆菌 迅速将接种环上的菌在待接种斜面试管，作Z形在斜面底部向上密集划线接种完毕后灼烧管口，塞上胶塞，灼烧接种环 塞紧胶塞，作好标记
②穿刺接种操作方法与上述相同，只是所用的是接种针将接种针从培养基中心刺入，直刺接近管底，然后拔出
③液体接种操作方法与上述相同，只是接种环在淹有液体的试管壁上轻轻摩擦就行了
④平板接种将上述三角瓶中的营养琼脂培养基煮沸，分装到1/3培养皿中划线接种采用四区法，消毒双手→点烧酒精灯→灭菌的接种环取菌→划第一区→灼烧接种环，冷却后→连两笔第一区划第二区→灼烧接种环，冷却后→连第二区两笔划第三区→单独划第四区→灼烧接种环，轻轻放好接种好的培养皿涂布接种用无菌的刻度吸管吸取0.2ml的菌悬液注入平板后，用无菌的涂布棒在平板表面均匀地涂布。（注：不可涂抹到皿壁）
6、将接种好的培养基放置恒温箱培养五、观察结果
1、了解一般培养基的配制原理，掌握培养基常规配制程序。
2、了解高压蒸汽灭菌和干热灭菌的原理，掌握操作步骤。
3、理解和掌握微生物接种、分离基本技术的原理及操作要点；熟悉微生物接种、分离的无菌操作技术。
二、实验原理
1、培养基是根据微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工方法配制而成的基质，是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料，主要含有微生物生长繁殖所必需的碳源、氮源、无机盐、生长因子及水分，并具有适宜的PH、合适的渗透压等。由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质要求各不相同，加之实验和研究目的不同，所以培养基的种类很多，需要按实际情况加以选择，但一般配制程序却大致相同：称药品→溶解→调pH→琼脂融化（补水，固体培养基用）→过滤（可省略）→分装→包扎标记→灭菌→摆斜面或倒平板→无菌检查
2、微生物在自然界中呈混杂状态共同存在，要获得特定的微生物，必需从中把它们分离出，即将待分离的样品进行一定的稀释，并使微生物的细胞（或他子）尽量以分散态存在，然后使其长成一个个纯种单菌落。然而上述工作又离不开接种，即将一种微生物转移到另一灭过菌的培养基上的过程。
三、材料与仪器
营养琼脂粉、半固体琼脂粉、营养肉汤粉、大肠杆菌、500ml烧杯与两个250ml烧杯、培养皿、刻度吸管、涂布棒、玻璃棒、接种环、接种针、酒精灯、打火机、电炉、电子称、洗耳球、棉线、报纸、灭菌锅、量筒、称量纸、三角瓶、试管、试管架等。
四、实验步骤
1、称药品：18.3g营养琼脂粉 1.1g半固体琼脂粉 0.9g营养肉汤粉
2、加水溶解，加热煮沸。
（注：肉汤只需加热）营养琼脂250mL/组；半固体琼脂50mL/组；营养肉汤50mL／组
3、培养基分装
取空白干净试管4支，每支试管装入1／3试管高度的营养琼脂培养基，加塞，包扎。剩下的营养琼脂培养基全部转移入250mL三角瓶，加塞，包扎。取空白干净试管4支，每支试管装入1/3试管高度的半固体琼脂培养基，加塞，包扎。取空白干净试管4支，每支试管装入1／3试管高度的营养内汤，加塞，包扎。
4、灭菌
培养基与生理盐水置于高压蒸汽灭菌锅里灭菌其它器皿放在干热灭菌锅灭菌。
5、接种
①斜面接种双手消毒，点燃酒精灯 左手握好斜面和有菌种的一面 两根试管塞过火，并旋转一下 灼烧接种环，右手拔下两根试管塞 冷却的接种环刮取少量大肠杆菌 迅速将接种环上的菌在待接种斜面试管，作Z形在斜面底部向上密集划线接种完毕后灼烧管口，塞上胶塞，灼烧接种环 塞紧胶塞，作好标记
②穿刺接种操作方法与上述相同，只是所用的是接种针将接种针从培养基中心刺入，直刺接近管底，然后拔出
③液体接种操作方法与上述相同，只是接种环在淹有液体的试管壁上轻轻摩擦就行了
④平板接种将上述三角瓶中的营养琼脂培养基煮沸，分装到1/3培养皿中划线接种采用四区法，消毒双手→点烧酒精灯→灭菌的接种环取菌→划第一区→灼烧接种环，冷却后→连两笔第一区划第二区→灼烧接种环，冷却后→连第二区两笔划第三区→单独划第四区→灼烧接种环，轻轻放好接种好的培养皿涂布接种用无菌的刻度吸管吸取0.2ml的菌悬液注入平板后，用无菌的涂布棒在平板表面均匀地涂布。（注：不可涂抹到皿壁）
6、将接种好的培养基放置恒温箱培养五、观察结果
