细胞复苏的原则
在实际操作中,冻存细胞要进行复苏,再培养传代。复苏细胞一般采用快速融化法。以保证细胞外结晶快速融化,以避免慢速融化水分渗入细胞内,再次形成胞内结晶损伤细胞。
所需材料
Ø 含有细胞的冻存管
Ø 37℃水浴锅
Ø 37℃预热的生长培养基
细胞的复苏流程
1.佩戴眼镜和手套,从液氮罐中取出冷冻管。
2.迅速放入37℃水浴中,并不时摇动,在1分钟内使其完全融化,然后在无菌下取出细胞。
3.在150g速度下离心5~10分钟,弃去上层液
4.加入适量培养液后接种于培养瓶中,接种浓度1×109 cell/L,置37℃温箱静置培养
5.次日更换一次培养液,继续培养,观察生长情况。
6.若细胞密度较高,及时传代。
注意事项
在细胞复苏操作时,应注意融化冻存细胞速度要快,可不时摇动冷冻管,使之尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。这样复苏的冻存细胞存活率高,生长及形态良好。
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